Countess3細胞計數儀作為一種高效、精準的細胞計數工具,在細胞生物學、醫學研究以及臨床實驗中得到廣泛應用。然而,設備的測量誤差是不可避免的,可能影響實驗結果的準確性。了解Countess3細胞計數儀常見誤差來源,并能迅速進行排查,是確保數據準確性的關鍵。
一、Countess3細胞計數儀的常見誤差來源
1.樣品濃度過高或過低
細胞計數儀的精確性依賴于樣品的濃度范圍。樣品濃度過高時,細胞數量過多,可能導致儀器無法準確區分細胞,造成計數誤差;而樣品濃度過低時,細胞分布稀疏,可能導致儀器對細胞的識別率降低。因此,合適的細胞濃度范圍(一般為10^4至10^6細胞/毫升)對于準確計數至關重要。
2.細胞沉淀與懸浮
在細胞懸浮液中,細胞往往會因重力或離心作用沉淀。沉淀的細胞如果沒有充分混勻,可能導致計數結果偏低。此外,細胞的懸浮狀態不均勻也會導致樣本區域的細胞數量不均,從而影響測量結果的精確度。
3.樣品液體的不潔凈
樣品中若含有雜質,如細胞碎片、氣泡或懸浮顆粒,這些雜質可能會被誤認為是細胞,影響儀器的識別和計數精度。在進行計數之前,樣品應當經過嚴格過濾和預處理,確保樣品的純凈。

4.細胞狀態問題
細胞狀態的變化會直接影響其在儀器中的表現。例如,細胞若處于凋亡或聚集狀態時,形態可能不規則,導致儀器誤識別或計數不準確。此外,細胞是否處于活躍狀態(如染色劑的使用)也可能影響計數結果。
5.儀器校準問題
需要定期校準,以確保其測量精度。如果儀器在使用前沒有經過適當的校準,或者使用過程中未進行校驗,可能導致誤差。儀器的光源、圖像處理軟件和顯微鏡系統等都可能是誤差來源。
6.操作人員的技術問題
操作人員的技術水平和操作熟練度對計數結果有重要影響。例如,使用不恰當的載玻片、滴定方式或樣本處理方式,都可能導致計數誤差。標準化操作程序和定期培訓是減少操作誤差的有效手段。
二、Countess3細胞計數儀誤差排查方法
1.檢查樣品濃度
檢查并調整細胞懸浮液的濃度。可通過顯微鏡觀察樣品來判斷細胞的分布狀態,確保細胞在適當的濃度范圍內。必要時,可使用細胞稀釋液對樣品進行適當稀釋,以確保濃度符合要求。
2.充分混勻樣品
在進行細胞計數前,務必確保樣品均勻混合。可以通過輕輕震蕩或使用磁力攪拌器來實現混勻,避免細胞沉淀導致的計數不準確。樣品混勻后,最好等待幾分鐘,讓細胞充分懸浮。
3.清潔樣品液體
使用過濾器(如0.22μm濾膜)過濾樣品,去除可能的雜質和氣泡。如果樣品中出現氣泡或沉淀,應該重新處理并避免氣泡干擾計數。
4.優化細胞狀態
確保細胞處于健康、活躍狀態,并避免使用大量死亡細胞。可以使用臺盼藍等染色劑來區分活細胞和死細胞,以提高準確性。細胞若出現聚集或團塊狀態,應進行適當的分散處理。
5.定期校準儀器
定期進行校準,并確保設備處于最佳工作狀態。根據儀器使用手冊進行必要的清潔和維護,確保其光源、鏡頭以及圖像識別系統都處于良好的狀態。
6.規范操作流程
操作人員應按照標準操作程序(SOP)進行樣品處理、計數及記錄。定期對操作人員進行培訓,提高其對儀器的熟悉度和對誤差來源的敏感性,以減少人為誤差。